产品目录

本试剂盒可用于检测样本中谷胱甘肽(GSH)的含量，适用于动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产等样本，效果均佳。

还原型谷胱甘肽（GSH）可与二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成一种黄色化合物，可在405nm下进行比色定量测定还原型谷胱甘肽（GSH）含量。

还原型谷胱甘肽（GSH）是机体内最重要的非酶性抗氧化物，具有清除自由基、解毒、促进铁质吸收及维持红细胞膜的完整性、维持脱氧核糖核酸的生物合成、细胞的正常生长发育及细胞免疫等多种重要生理功能。谷胱甘肽是谷氨酸、甘氨酸和半胱氨酸组成的一种三肽，是组织中主要的非蛋白质的巯基化合物，并且是GSH-PX和GSH-ST两种酶类的底物，为这二种酶分解氢过氧化物所必需，并能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其它辅因子受氧化损伤。GSH是一种低分子清除剂，可清除O2-、H2O2、LOOH，因而GSH量的多少是衡量机体抗氧化能力的重要因素。

• 试剂一为过饱和溶液，如有结晶，则取上清进行实验。
  
• 试剂四温度较低时可能会有结晶产生，此时可将试剂37℃融化后使用。

含405～420nm波长的酶标仪及96孔板、台式低速离心机、各种规格移液器、双蒸水、生理盐水（0.9%）或PBS（0.1M）、涡旋混匀器、离心管、蛋白测定试剂。

• GSH标准品溶剂应用液：临用前将标准品溶剂贮备液∶双蒸水=1∶9稀释成GSH标准品溶剂应用液。
  
• 20μmol/L GSH标准液：测定前将一支GSH标准品用10mL标准品溶剂应用液溶解，配成1mmol/LGSH标准液（2℃～8℃可保存1～2周）；再取此1mmol/L GSH标准液0.2mL加标准品溶剂应用液9.8mL配成20μmol/L GSH标准液（现用现配）。

• 样本收集好后请尽快检测（最好是立即测定），因样本中相关酶会分解自身的GSH，导致结果偏低；
  
• 孔板操作时不要加入气泡，以免影响读数；
  
• 标准曲线可不做，按计算公式计算即可；
  
• 细胞样本测定时，尽量多的收集细胞来测定，细胞数越多越好，最低不要低于10⁶个。

• 培养细胞：将收集好的细胞，用PBS清洗1～2次后，低速离心收集沉淀细胞，再加入0.3～0.5mL（0.1M、pH7.4）的等渗PBS缓冲液悬浮细胞，超声或手动研磨破碎细胞(此处也可将PBS替换成试剂一，细胞破碎后直接离心取上清作显色反应，但需要将细胞提前计数才行)，取破碎后的细胞悬液0.1mL，加0.1mL试剂一混匀，3500转/分，离心10分钟，取上清液作显色反应。
  
• 组织样本：
  
  • 方法一：准确称取组织重量（约0.05g），按重量(g)∶体积(mL)＝1∶9的比例，加入生理盐水制成组织匀浆，2500转/分，离心10分钟，取匀浆上清（此匀浆上清需分出一部分用于测定蛋白浓度）0.1mL，加0.1mL试剂一混匀，3500转/分，离心10分钟，取上清液作显色反应。
    
  • 方法二:准确称取组织重量（约0.02g），按重量(g)∶体积(mL)＝1∶9的比例，加入试剂一，机械匀浆，3500转/分，离心10分钟，取上清作显色反应。
• 血清（浆）样本：取血清（浆）0.05mL，加试剂一0.2mL混匀，3500转/分，离心10分钟，取上清液作显色反应。
  
• 全血样本：取0.1mL肝素抗凝全血加双蒸水0.9mL，充分混匀，直至透亮为止。取该10倍溶血液0.05mL，加0.2mL试剂一混匀，3500转/分，离心10分钟，取上清液作显色反应。
  
  • 以上取得的上清假如还是比较浑浊（或高脂），可在上清中加入0.1mL氯仿，涡旋混匀，抽提60秒后，再离心收取上清做显色反应。

• 按下表加入样本用试剂一处理后取得的上清液。
  

  成分	空白孔	标准孔	测定孔
  试剂一	100μL
  20μmol/LGSH标准液		100μL
  上清液			100μL
  试剂三	25μL
  试剂二	100μL

• 轻轻震荡孔板混匀，静置5分钟，405nm处，酶标仪测定各孔吸光度值A。

• 全血样本：
  

  全血中GSH含量 (μmol/L)	＝	A测定－A空白	×C标准×5×10
  		A标准－A空白

  
  
  • C_标准为标准液浓度，20μmol/L；
    
  • 5为样本前处理稀释倍数；
    
  • 10为样本测试前稀释倍数。
• 细胞及组织样本：
  
  • 方法一：此法为生理盐水匀浆后的计算方式
    

    细胞及组织中GSH含量 (μmol/gprot)	＝	A测定－A空白	×C标准×2÷Cpr
    		A标准－A空白

    
    
    • C_标准为标准液浓度，20μmol/L；
      
    • 2为样本前处理稀释倍数；
      
    • Cpr为样本蛋白浓度，gprot/L（prot指蛋白）。
  • 方法二：此法为试剂一作匀浆介质匀浆的计算方式
    

    组织中GSH含量 (μmol/g组织)	＝	A测定－A空白	×C标准×V样总÷W
    		A标准－A空白

    
    
    

    细胞中GSH含量 (μmol/104个细胞)	＝	A测定－A空白	×C标准×V样总÷m
    		A标准－A空白

    
    
    • C_标准：标准液浓度，20μmol/L；
      
    • V_样总：样本用试剂一匀浆时加入的试剂一的体积，L；
      
    • W：样本质量，g；
      
    • m：细胞数量，10⁴个
• 血清（浆）样本：
  

  血清(浆)中GSH含量 (μmol/L)	＝	A测定－A空白	×C标准×5
  		A标准－A空白

  
  
  • 5为样本前处理稀释倍数(1∶4)；
    
  • C_标准为标准液浓度，20μmol/L。